ⅠNуклеинска киселинаiувод
Нуклеинска киселина је подељена на дезоксирибонуклеинску киселину (ДНК) и рибонуклеинску киселину (РНА), међу којима је РНК подељена на рибозомалну РНК (рРНА), гласничку РНК (мРНК) и преносну РНК (тРНК) према различитим функцијама.ДНК је углавном концентрисана у језгру, митохондријама и хлороформу, док је РНК углавном распоређена у цитоплазми.Као материјална основа експресије гена, екстракција нуклеинске киселине игра изузетно важну улогу у истраживању молекуларне биологије и клиничкој молекуларној дијагнози.Концентрација и чистоћа екстракције нуклеинске киселине директно ће утицати на накнадни ПЦР, секвенцирање, конструкцију вектора, варење ензима и друге експерименте.
Ⅱ Метода екстракције и пречишћавања нуклеинске киселине
① Метода екстракције фенолом/хлороформом
Екстракција фенолом/хлороформом је класична метода за екстракцију ДНК, која углавном користи два различита органска растварача за третирање узорака, растварајући нуклеинску киселину засновану на ДНК у воденој фази, липиде у органској фази и протеине између две фазе.Ова метода има предности ниске цене, високе чистоће и доброг ефекта.Недостаци су компликована операција и дуго време.
② Тризол метода
Тризол метода је класична метода за екстракцију РНК.Тризол метода се дели на водену фазу и органску фазу након центрифугирања са хлороформом, у којој се РНК раствори у воденој фази, водена фаза се пребацује у нову ЕП епрувету, добија се таложење након додавања изопропанола, а затим пречишћавање етанолом.Ова метода је погодна за екстракцију РНК из животињских ткива, ћелија и бактерија.
③ Метода пречишћавања центрифугалне колоне
Метода пречишћавања колоне центрифуге може адсорбовати ДНК специфично кроз специјалне материјале за адсорпцију силицијумске матрице, док РНК и протеин могу да прођу глатко, а затим користе висок ниво соли са ниским ПХ да комбинују нуклеинску киселину, елуцију са ниском сољу са високом ПХ вредност за одвајање и пречишћавање нуклеинске киселине.Предности су висока концентрација пречишћавања, висока стабилност, нема потребе за органским растварачем и ниска цена.Недостатак је што га треба центрифугирати корак по корак, више радних корака.
④ Метода магнетних перли
Метода магнетних перли је да се узорак ћелијског ткива подели кроз лизат, ослободи нуклеинска киселина у узорку, а затим се молекули нуклеинске киселине специфично адсорбују на површини магнетне куглице, док се нечистоће као што су протеини и шећери остављају у течност.Кроз кораке цепања ћелијског ткива, везивања магнетних куглица са нуклеинском киселином, испирања нуклеинске киселине, елуирања нуклеинске киселине, итд., коначно се добија чиста нуклеинска киселина.Предности су једноставно руковање и кратко време коришћења, без потребе за постепеним центрифугирањем.Има ниске техничке захтеве и може да реализује аутоматски и масовни рад.Специфична комбинација магнетне куглице и нуклеинске киселине чини екстраховану нуклеинску киселину високе концентрације и чистоће.Недостатак је што је тренутна тржишна цена релативно скупа.
⑤ Друге методе
Поред горње четири методе, ту су и крековање кључања, метода концентроване соли, метода ањонског детерџента, ултразвучна метода и ензимска метода итд.
Ⅲ Врста екстракције нуклеинске киселине
Форегене има водећу директну ПЦР платформу на свету, платформу за изолацију РНК са две колоне (само ДНК + само РНК).Главни производи укључују комплете за изолацију ДНК/РНА, серије молекуларних лабораторијских реагенса ПЦР и Дирецт ПЦР реагенса.
① Укупна екстракција РНК
Узорци за екстракцију укупне РНК укључују крв, ћелије, животињска ткива, биљке, вирусе, итд. Висока чистоћа и висока концентрација укупне РНК се могу добити екстракцијом укупне РНК, која се може користити у РТ-ПЦР, анализи чипова, ин витро транслацији, молекуларно клонирање, Дот Блот и други експерименти.
Форегене везанеКомплети за изолацију РНК
Комплет за изолацију укупне РНК животиња--Брзо и ефикасно екстрахујте укупну РНК високе чистоће и високог квалитета из различитих животињских ткива.
Комплет за изолацију укупне РНК ћелија--Високо пречишћена и висококвалитетна укупна РНК може се добити из различитих култивисаних ћелија за 11 минута.
Комплет за изолацију укупне РНК биљака--Брзо екстрахујте висококвалитетну укупну РНК из биљних узорака са ниским садржајем полисахарида и полифенола.
Комплет за изолацију вирусне РНК-- Брзо изолујте и пречистите вирусну РНК из узорака као што су плазма, серум, телесне течности без ћелија и супернатанти ћелијске културе.
② Екстракција геномске ДНК
Узорци за екстракцију геномске ДНК обухватају земљиште, измет, крв, ћелије, животињска ткива, биљке, вирусе, итд. Екстракција геномске ДНК се може користити за варење ензима, изградњу ДНК библиотеке, ПЦР, припрему антитела, Вестерн блот анализу хибридизације, генски чип, високо -секвенционирање протока и други експерименти.
Форегене везанеКомплети за изолацију ДНК
Комплет за изолацију ДНК животињског ткива--Брза екстракција и пречишћавање геномске ДНК из више извора, као што су животињска ткива, ћелије итд.
Блоод ДНК Миди комплет (1-5мл)--Брзо пречишћавање висококвалитетног геномског ДНК из антикоагулиране крви (1-5мл).
Комплет за изолацију ДНК букалног бриса/ФТА картице--Брзо очистите висококвалитетни геномски ДНК из узорака букалног бриса/ФТА картице.
Комплет за изолацију ДНК биљака-- Брзо пречишћавање и добијање висококвалитетног геномског ДНК из биљних узорака (укључујући полисахариде и узорке полифенола)
③ Екстракција плазмида
Плазмид је врста кружне ДНК малих молекула у ћелијама, која је уобичајени носач за рекомбинацију ДНК.Метода екстракције плазмида је уклањање РНК, одвајање плазмида од бактеријске геномске ДНК и уклањање протеина и других нечистоћа да би се добио релативно чист плазмид.
Генерал Пласмид Мини Кит-- Брзо пречишћавање висококвалитетног плазмида ДНК од трансформисаних бактерија за рутинске експерименте молекуларне биологије као што су трансформација и варење ензима
④ Друге врсте екстракције, екстракција миРНА, итд.
Комплет за изолацију миРНА животиња- Брзо и ефикасно екстрахујте мале фрагменте РНК од 20-200нт миРНА, сиРНА, снРНА из различитих животињских ткива и ћелија
Ⅳ Захтеви за екстракцију нуклеинске киселине и резултат пречишћавањаs
① Да би се обезбедио интегритет примарне структуре нуклеинске киселине.
② Смањите интерференцију протеина, шећера, липида и других макромолекула
③ Не би требало да постоји органски растварач или висока концентрација металних јона који могу да инхибирају ензим у узорцима нуклеинске киселине.
④ РНК и друге контаминације нуклеинским киселинама треба елиминисати приликом екстракције ДНК, и обрнуто.
Време поста: 24.11.2022
